我們先來(lái)簡(jiǎn)單了解一下熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的工作原理。

熒光顯微鏡：熒光顯微鏡是以紫外線為光源，樣品自身發(fā)光或者經(jīng)過(guò)熒光染料或熒光抗體染色處理之后，照射被檢物體，受紫外激發(fā)產(chǎn)生熒光，探測(cè)器檢測(cè)，在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。

激光共聚焦顯微鏡：全稱是激光掃描共聚焦熒光顯微鏡，是一種利用計(jì)算機(jī)、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)，以激光作為光源，逐點(diǎn)激發(fā)樣品內(nèi)熒光，采用精密針孔濾波技術(shù)，有效抑制了非聚焦平面的雜散光，具有層析成像能力和很高的成像信噪比。在熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上添加了激光掃描裝置，激光從發(fā)射器發(fā)出，在照明針孔分成三束，經(jīng)過(guò)分光鏡反射，在物鏡處折射，聚焦于樣品的焦平面上，如果樣品中有被激光激發(fā)的熒光基團(tuán)，就會(huì)產(chǎn)生熒光，按照激光進(jìn)入的光路原路返回，返回的熒光在成像系統(tǒng)（一種可以把光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳感器）中再次聚焦成相。因?yàn)?/span>在兩個(gè)位置（樣品和成像系統(tǒng)）聚焦，所以叫做共聚焦。

熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別。

熒光顯微鏡又叫寬場(chǎng)熒光顯微鏡，當(dāng)成像面較厚，焦面上方下方的干擾信號(hào)都會(huì)被觀察到，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此熒光顯微鏡只能觀察靜態(tài)的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

激光共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過(guò)計(jì)算機(jī)控制來(lái)進(jìn)行數(shù)字化圖像采集和處理的系統(tǒng)。可以觀察亞細(xì)胞層次的一些生化變化，是目前先進(jìn)的分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器。

激光共聚焦顯微鏡比普通熒光顯微鏡獲得更高對(duì)比度、高分辨率圖像，同時(shí)具有高靈敏度，對(duì)檢測(cè)樣品無(wú)損傷、可靠和優(yōu)良重復(fù)性。激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r(shí)可觀察并可形成清晰的三維圖像等優(yōu)點(diǎn)，能比寬場(chǎng)看到的成像面更薄，更清晰，在較以往更短的采集時(shí)間內(nèi)輕松實(shí)現(xiàn)超高分辨率更大觀察視野成像。