一般熒光顯微鏡均采用柯勒照明。所謂柯勒照明是一種能夠得到圖像Z大對(duì)比和Z大分辨的折中方法。這時(shí)，燈絲成像在孔徑光闌上，一般也成像在物鏡Z后一片鏡框上。孔徑光闌是限制光源大小的光闌，而視場(chǎng)光闌是限制人眼在目鏡里看到視野大小的光闌。只有在正確校準(zhǔn)柯勒照明的條件下，熒光顯微鏡才能獲得它的更合適的光學(xué)性能。

柯勒照明校準(zhǔn)方法如下：

①調(diào)焦：把樣品放在工作臺(tái)上，沿光軸方向移動(dòng)工作臺(tái)或物鏡，對(duì)樣品進(jìn)行調(diào)焦，使成像清晰。

②打開(kāi)孔徑光闌，把孔徑光闌開(kāi)到Z大。

③關(guān)小視場(chǎng)光闌，于是在視場(chǎng)里可以看到視場(chǎng)光闌的影子，即周?chē)蝗ψ儼担挥兄虚g是亮的。調(diào)節(jié)聚光鏡上下位置，使視場(chǎng)光闌邊緣清晰。調(diào)節(jié)聚光鏡上調(diào)中螺絲，使視場(chǎng)光闌居

④減小孔徑光闌，一直到視場(chǎng)里看到Z好的像為止，一般孔徑光闌為其Z大時(shí)的70%。